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干细胞培养实验室设计之仪器设备和器皿用具:
(一)常规设备
1、天平
干细胞培养实验室需要2~3台不同精度的天平。感量0.g的天平(分析天平)和感量0.0g的天平(电子天平)用于称量微量元素和一些较高精确度的实验用品。感量0.01g和0.1g的天平,用于大量元素母液配制和一些用量较大的药品的称量。
2、冰箱
各种维生素和激素类药品以及培养基母液均需低温报存,某些试验还需植物材料进行低温处理,一般普通冰箱即可。
3、酸度计
用于测定培养基及其它溶液的pH,一般要求可测定pH范围1~14之间,精度0.01即可。
4、离心机
用于细胞、原生质体等活细胞分离,亦用于培养细胞的细胞器、核酸以及蛋白质的分离提取。根据分离物质不同配置不同类型的离心机。细胞、原生质体等活细胞的分离用低速离心机;核酸、蛋白质分离用高速冷冻离心机;规模化生产次生产物,还需选择大型离心分离系统。
5、加热器
用于培养基的配制。研究性实验室一般选用带磁力搅拌功能的加热器,规模化大型实验室用大功率加热和电动搅拌系统。
6、其它
纯水器、分装设备
(二)灭菌设备
维持相对得无菌环境是组织培养实验室的基本要求。
1、高压灭菌锅
用于培养基、玻璃器皿以及其它可高温灭菌用品的灭菌,根据规模大小有手提式、立式、卧式等不同规格。2、干热消毒柜
用于金属工具如镊子、剪刀、解剖刀,以及玻璃器皿的灭菌。一般选用℃左右的普通或远红外消毒柜。3、过滤灭菌器
用于一些酶制剂、激素以及某些维生素等不能高压灭菌试剂的灭菌,主要有真空抽滤式和注射器式。
4、紫外灯
方便经济的控制无菌环境的装置,缓冲间、接种室和培养室必备。
(三)无菌操作设备1、接种箱
是使用较早的最简单的无菌装置,主体为玻璃箱罩、入口有袖罩,内装紫外灯和日光灯,使用时对无菌室要求较高。
2、净化工作台
其操作台面是半开放区,具方便、操作舒适优点,通过过滤的空气连续不断吹出,大于0.03μm直径的微生物很难在工作台的操作空间停留,保持了较好的无菌环境。由于过滤器吸附微生物,使用一段时间后过滤网易堵塞,因此应定期更换。
(四)培养设备
培养设备是指根据需要所选用的不同规格和控制精度的用于植物细胞、组织和器官培养的设施和设备。
1、培养架
目前所有植物组织培养实验室植株繁殖培养的通用设施。成本低、设计灵活、可充分利用培养空间,以操作方便、最大限度利用培养空间为原则。一般有4~5层,层间间隔40~50cm,光照强度可根据培养植物特性来确定,一般每架上配备2~4盏日光灯。
2、培养箱
细胞培养、原生质体培养等要求精确培养的实验,可用光照培养箱、CO2培养箱、湿度控制培养箱等培养。3、摇床
进行液体培养时,为改善通气状况,可用振荡培养箱或摇床。
4、生物反应器
进行植物细胞生产次生产物的实验室,还需生物反应器。
(五)其他设备
可安装时间程序控制器、温度控制系统或空调;实体显微镜、倒置式生物显微镜及配套的摄影、录像和图像处理设备;电泳仪、萃取和层析设备、紫外分光光度计、高效液相色谱仪、气相色谱仪、酶联免疫测定系统。
四、培养容器与用具
培养容器指盛有培养基并提供培养物生长空间的无菌置,培养用具指培养物接种封口所用的各种金属或塑料制品,实验室必备。
(一)培养容器
包括各种规格的培养皿、三角瓶、试管、培养瓶。玻璃容器,一般用无色并不产生颜色折射的硼硅酸盐玻璃材质。塑料容器材质轻、不易破碎、制作方便,广泛使用。一般为聚丙烯、聚碳酸酯材料的培养容器。
(二)金属用具
1、镊子
植物组织解剖用小的尖头镊子,分株转移繁殖转接用枪型镊子,16~22cm长。
2、剪刀
不锈钢医用弯头剪,做取材和切段转移繁殖,14~22cm。
3、解剖刀
组织切段,多用短柄可换刀片的医用不锈钢解剖刀。
4、其他用具
接种铲、接种针在花药培养、花粉培养中有用。
(三)塑料用具
各种封口膜、盖、塑料盘及其它实验用具。
五、培养主要试剂
1、激素类:
6-BA、6-KT、CPA、BPA、ABA、IAA、IBA、IPA、NAA、TIBA、BNOA、GA、2,4-D、CPPU、异戊烯基腺嘌呤(2iP)、苯基噻二唑基脲(TDZ)、腺嘌呤、腺嘌呤硫酸盐、毒莠定、反-玉米素、(±)Jasmonicacid、Dicamba等。
2、有机和无机试剂类:
VB、核黄素、抗坏血酸、D-生物素、叶酸、青霉素、庆大霉素、卡那霉素、链霉素、肌醇、蛋白胨、水解酪蛋白、酪蛋白、水解乳蛋白、硝酸铵、硝酸钾、硫酸镁、无水氯化钙、磷酸二氢钾、EDTA、硫酸亚铁、硼酸、蔗糖、消毒剂等。
3、培养基:
琼脂粉、琼脂条、卡拉胶、魔芋胶等。
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